原代細胞培養(yǎng)是細胞實驗中較為重要的一環(huán)，同時該實驗也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來一起總結一下，原代細胞培養(yǎng)，都有哪些注意事項。

常見的原代細胞類型

上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、黑色素細胞、神經(jīng)元、星形膠質細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。

原代細胞的優(yōu)缺點

 

原代細胞VS細胞系

能夠培養(yǎng)的細胞系，已經(jīng)獲得了通過隨機突變或通過修飾（例如癌癥基因的人工表達）轉化的癌細胞系中的無限增殖（永生化）的能力。連續(xù)細胞系通常比原代細胞更堅固，更易于操作。它們具有無限的增長潛力，是獲取基本信息的快速簡便方法。使用連續(xù)細胞系的一些缺點是它們是經(jīng)過基因修飾/轉化的，可以改變生理特性并且不代表體內狀態(tài)，并且隨著時間的流逝，這可能會進一步改變。

而原代培養(yǎng)得來的細胞不具備無限分裂的能力，但可以相對更好地還原生物體內細胞生長狀況。

 

倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？

倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或對數(shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在的錯誤

污染：轉移主要組織進行培養(yǎng)時需要注意避免污染。

pH值變化：這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確，細菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。

粘附性不足（細胞不貼壁）：培養(yǎng)基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染，細胞被胰蛋白酶過度消化等。

生長緩慢：原因包括培養(yǎng)基的pH值變化，必需的促進生長的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲藏不當?shù)取?/span>

細胞死亡：溫度波動，二氧化碳含量過低，在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損，有毒代謝產(chǎn)物濃度增加，培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導致細胞存活率降低。

沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養(yǎng)基，在pH不變的培養(yǎng)基中可能會出現(xiàn)沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。

細胞結塊（細胞不貼壁且結塊）：懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細胞裂解及DNA釋放（過度用蛋白水解酶消化）而結塊。

誘導變異性：多種試劑和培養(yǎng)基會誘導原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異，研究者的處理手法也可能導致原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。

• 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

一款優(yōu)質的血清，能成為細胞實驗的“*輔助”。

Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比，有*優(yōu)勢：

 

1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml）。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應品牌。

2. 新批次在試用前，提供試用服務，養(yǎng)細胞更放心。

3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升，試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定，保證大多數(shù)項目兩年不需換批次，細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

4. 每年按廠家生產(chǎn)順序，會有多批次平行供應，每個實驗室專屬批號管理，保證供貨穩(wěn)定。

5. 為Ausbian血清用戶免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類項目的申報提供支持。（同時為血清VIP用戶在支原體檢測、方法學驗證等方面，提供更多免費延伸性技術幫助）。

6. 針對特殊科研項目，可提供3-5個平行批次，讓試驗人有更多選擇空間。

7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務，為儲存空間不足的實驗室提供可靠的血清倉儲保護，按要求隨時發(fā)貨。

8. Ausbian血清從出廠，到實驗室，全程低溫冷鏈保護，確保血清無反復凍融。

9. 免費真品保障，每個血清瓶身加貼Viansaga®易破損防偽標簽，Ausbian品牌真品保護，逢假必究，為實驗室做好售后保障。

10. 免費無憂售后，所有實驗室簽收的Ausbian胎牛血清，從簽收日開始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開封未融化、且不影響二次銷售的情況下，均可享受無條件退貨或換貨的售后保障。

11. 免費專業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬個血清用戶細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，為各種細胞培養(yǎng)提供問題梳理分析，解決方案參考。

12. Ausbian品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線：

特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清（貨號：WS500T(紅點)），透析胎牛血清 （貨號：VS500TZ ）等多系列產(chǎn)品，服務更專業(yè)更精準。