在進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中,相信大家都有這樣的經(jīng)歷:實(shí)驗(yàn)規(guī)劃恨不得精細(xì)到每小時(shí),甚至連哪天出數(shù)據(jù)都預(yù)估好了。
But......
理想很豐滿,現(xiàn)實(shí)往往很骨感!
“隔壁王師兄的細(xì)胞都能傳代了,我的這細(xì)胞,咋長(zhǎng)得這么慢呢?"
所以今天,我們就來(lái)聊聊,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢(異常情況的慢,一些特殊細(xì)胞不在討論范圍內(nèi))的可能原因。
原因很復(fù)雜,可以總結(jié)為以下幾點(diǎn),如果小伙伴們有更多觀點(diǎn),歡迎補(bǔ)充
細(xì)胞可能存在污染
各類細(xì)胞污染
都有可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
如果培養(yǎng)體系,不小心被細(xì)菌、真菌、支原體污染,都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因缺乏營(yíng)養(yǎng)而出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的現(xiàn)象。
細(xì)菌污染發(fā)展迅速,一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)基渾濁、變黃的現(xiàn)象;真菌污染最好辨認(rèn),顯微鏡下可見(jiàn)絲狀菌體(有些甚至嚴(yán)重到肉眼可見(jiàn));而支原體污染往往防不勝防,顯微鏡下也很難捕捉到它的身影。支原體污染的典型特征是培養(yǎng)基提前變黃、細(xì)胞生長(zhǎng)受阻,后期細(xì)胞大量死亡等。
培養(yǎng)體系有瑕疵
沒(méi)有根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整培養(yǎng)體系
細(xì)胞的體外培養(yǎng),依賴于*培養(yǎng)基的支持與保護(hù)。有些小伙伴拿到一株陌生的細(xì)胞,沒(méi)有將培養(yǎng)體系研究清楚就開(kāi)始實(shí)驗(yàn),由于培養(yǎng)環(huán)境的改變,導(dǎo)致細(xì)胞一時(shí)無(wú)法適應(yīng),而出現(xiàn)生長(zhǎng)受阻甚至停滯的狀態(tài)。
當(dāng)我們排除了細(xì)胞污染的情況后,就要考慮培養(yǎng)體系是否合理了:培養(yǎng)基種類、品牌是否進(jìn)行過(guò)更換?血清類型是否用錯(cuò)等等,盡可能保證與原培養(yǎng)條件一致,如果要更換,也要循序漸進(jìn)。
細(xì)胞初始狀態(tài)較差
細(xì)胞長(zhǎng)得慢
很可能不是你的鍋
可能最一開(kāi)始復(fù)蘇的細(xì)胞,就被污染/活力不足。因此,建議大家再?gòu)?fù)蘇一管同種細(xì)胞(最好不是同批次凍存的),與現(xiàn)有細(xì)胞進(jìn)行比較,觀察長(zhǎng)勢(shì)。