何為熱滅活?
經常使用血清作為添加劑來培養細胞的小伙伴,對熱滅活應該都不陌生。
一般情況下,血清的滅活是指解凍后的血清,通過水浴加熱的方式,將其加熱至56℃維持30分鐘,或者40℃維持20分鐘,以達到滅活補體的目的。
補體是什么?
既然熱滅活的主要針對補體,那么我們就要搞清楚補體的是什么?有哪些基本的功能?
什么是補體?
補體是廣泛存在于人和脊椎動物體血清及組織液中,不耐熱,活化后具有酶活性、可介導免疫應答和炎癥反應的一類蛋白質。
補體的基本功能
補體系統可通過3條既相對獨立又相互聯系的途徑被激活,從而發揮生理作用。
包括但不限于調理吞噬、裂解細胞、介導炎癥、免疫調節和清除免疫復合物等多種生物學效應,包括增強吞噬作用,增強吞噬細胞的趨化性;增加血管的通透性;中和病毒;細胞溶解作用;免疫反應的調節作用;刺激平滑肌收縮、細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。
血清是否均需要熱滅活?
血清的最佳工作溫度一般是在37℃左右,所以熱滅火對于血清而言,也是一種不小的傷害,會導致一些營養成分流失,進而影響細胞狀態。
但如果所用血清中含有補體,且所培養的細胞、所涉及的實驗對補體相關的蛋白較為敏感,建議進行熱滅活處理。
胎牛血清
正規的胎牛血清,要求對5-8月胎齡(一般牛在10個月左右足月,后自然分娩)的胎牛采用心臟穿刺的方法采血,隨后進行其他制備步驟,得到胎牛血清。
因此:
靠譜的胎牛血清,沒有形成一個完整的補體系統,不會真正地干預免疫!
非胎牛血清
新生牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清、豬血清這類動物血清,一般采集自補體系統發育*的供體,因此,如果涉及以下幾個方向(包括但不限于)建議合理熱滅活。
1、免疫學研究
2、誘導胚胎干細胞分化
3、利用昆蟲細胞研究病毒感染
4、培養平滑肌細胞
5、其他補體參與的細胞培養過程